大规模的转录组数据分析正在迅速探究在特定细胞类别当中;也理解与脑细胞精神病因涉及的基因。理解和用药这些病因的分析方法将并不需要凋亡和驱使特定突触棒状菌株的分析方法。因此,在非生命哺乳动物和生命当中受伤害这些一些人已趋于至关重要。重组腺涉及菌株(rAAVs)是在脑细胞子系统当中开展基因传递的首选分析方法,对特定的突触个体没有内在的抑制。子系统的大幅提高子发现已经通过允许以单细胞清晰度开展转录组和表观遗传学数据分析的技术的最新持续发展而获得加速。但对于大幅提高子自由选择的关键字维度一直很大。为了集当中我们的大幅提高子自由选择,著者自由选择专门数据分析Scn1a的基因表达态势,Scn1a是在并不相同突触个体当中理解的基因,其破坏与严重的癫痫病涉及。结合应用于比如说比如说染色质化学合成(scATAC-seq)数据集的单细胞检测与串连品种的核苷酸保守性融为一体,著者在该基因附近提名了十个候选基因表达核苷酸。著者断定了三种大幅提高子,共同凋亡理解Scn1a的突触个体的广度。其当中,一种特定的粗基因表达核苷酸需要将菌株理解限制为理解PV的大脑皮层当尾端突触(PV cIN)。
分析方法:四名人脑(两名男同性恋/两名妇女,成年22-57岁)接受了一项外科手术,缝合了人脑细胞组织(大脑细胞皮层和中枢神经系统)以用药乙型肝炎癫痫。在所有的病例当中,每个参与者都曾接受过一次初步的手术,摆放在硬膜下和/或浅层电极开展颅内监测,以断定癫痫头痛的位置。从海马和大脑细胞皮层取300μm外皮,在海马外皮当中,菌株的凋亡是membrane亚区。在传染菌株后7~14d对培育出的人外皮开展电生理历史纪录。将培育出的人外皮转移到历史纪录室。对固有膜和电弧功用开展分析。啮齿类动物分别保持在17.8–26.1℃和30–70%的宏观高温和湿度范围内。这些值被密切监测和驱使在啮齿动物散居室。从麻省理工学院(MIT)的个体当中获得了一只雌性普通鬣狗猴(6岁数)。成年(2岁)雄性猴(macacamulatta)来自亚利桑那州大学霍华德两所的亚利桑那州国家哺乳动物数据分析当中心。在小鼠脑细胞外皮器(Zivic Instruments)上开展棒状外皮,并在冰冷的人工结核液(ACSF)当中解剖学V1大脑皮层。经过处理后,应用于应用于Nova-Seq S2 100循环试剂盒(Illumina)开展化学合成。
结果:在正常人或病理持续发展只能(有数Dret肉瘤)检查线圈茁壮的早期动态的主要障碍是,在不应用于育种动物的只能无法进入特定的细胞类别。即使转用适合于的遗传策略,年轻的PV cIN也很难视作靶标。考虑到它们的核素(它们代表人所有外周cIN的40%)并且出现得相对较晚。更广为地说,在本数据分析当中断定的大幅提高子缺少了具备特殊临床意义的突触个体的访问途径。最明显的是,这些大幅提高剂可以通过基因疗法或调节突触活性而潜在地应用于过重Dret肉瘤的衰退症状。著者证明了局部和全身注射可应用于有效的菌株传递到人脑细胞。通过局部注射,才会改善局灶性癫痫,PFC功能障碍或海马记忆障碍。相比,子系统性导入菌株可应用于并不需要年底介入的只能,例如,纠正连续性癫痫头痛或精神病和脑细胞退行性病因。著者的数据分析确实,对基因表达成分的规范检验为用药环境污染当中特定细胞类别的获取缺少了路线图。重要的是,证明了我们的大幅提高子自由选择分析方法可推展到其他基因。总体而言,我们发现了一组七个针对并不相同突触个体和当中枢脑细胞子系统区域具备独有特异性的大幅提高剂。即使转用了规范的标准(对远距离一些人的抑制> 90%),我们的分析方法仍具备显着的成功率(> 20%)。此外,正如持续性保守的核苷酸所预测的那样,著者测试的大幅提高同构在有数生命在内的所有品种当中被证明具备同等的抑制和精确性。
Vormstein-Schneider, D., Lin, J.D., Pelkey, K.A. et al. Viral manipulation of functionally distinct interneurons in mice, non-human primates and humans. Nat Neurosci (2020).
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